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    細(xì)胞吞噬活動(dòng)觀察實(shí)驗(yàn)

    發(fā)布時(shí)間: 2023-01-13  點(diǎn)擊次數(shù): 1077次

    簡(jiǎn)介

    高等動(dòng)物體內(nèi)存在著具有防御功能的吞噬細(xì)胞系,它是由單核細(xì)胞和粒細(xì)胞等白細(xì)胞構(gòu)成,是機(jī)體內(nèi)免疫系統(tǒng)的重要組成部分。在白細(xì)胞中,以粒細(xì)胞和單核細(xì)胞的吞噬活動(dòng)較強(qiáng),故被稱為吞噬細(xì)胞。

    原理

    細(xì)胞吞噬活動(dòng)觀察實(shí)驗(yàn)的基本原理是單核細(xì)胞由血液進(jìn)入組織后逐漸演變成巨噬細(xì)胞。巨噬細(xì)胞主要靠吞噬作用處理異物;當(dāng)機(jī)體受到細(xì)菌等病原體或其他異物入侵時(shí),巨噬細(xì)胞首先在趨化因子的作用下向異物移動(dòng),然后伸出偽足包裹異物,將異物吞入胞漿內(nèi)形成吞噬泡,隨后溶酶體與吞噬泡融合并消化異物。

    材料與儀器

    器材:
    載玻片、蓋玻片、解剖剪、鑷子、2 ml 注射器、針頭、光學(xué)顯微鏡、小白鼠、蟾蜍。
    試劑:

    ① 6% 淀粉肉湯(含 0.3% 臺(tái)盼藍(lán));

    ② 1% 雞紅細(xì)胞懸液

    (取雞血 1 ml(肝素抗凝)加入到 99 ml 雞生理鹽水中);

    ③小鼠生理鹽水
    ④雞生理鹽水
    ⑤蟾蜍生理鹽水
    ⑥墨汁

    步驟

    細(xì)胞吞噬活動(dòng)觀察實(shí)驗(yàn)的基本過(guò)程可分為如下幾步:

    (一)觀察小鼠腹腔巨噬細(xì)胞的吞噬活動(dòng)

    A 實(shí)驗(yàn)前 2 天,每天向小鼠腹腔注射 6% 淀粉肉湯 1 ml(起標(biāo)記作用),以誘導(dǎo)腹腔產(chǎn)生較多的巨噬細(xì)胞(此操作由教師在實(shí)驗(yàn)前完成)。
    B 實(shí)驗(yàn)時(shí),每組取 1 只經(jīng)上述處理過(guò)的小鼠,腹腔注射 1% 雞紅細(xì)胞懸液 0.5~1 ml(注射時(shí)從小鼠下腹外側(cè)進(jìn)針,呈 45° 角刺入腹腔),然后輕揉小鼠腹部以使細(xì)胞懸液分散均勻。
    C 30 min 后,再向腹腔內(nèi)注射 0.5 ml 小鼠生理鹽水,輕揉小鼠腹部,使其腹腔液稀釋。
    D 3 min 后,頸椎脫位法處死小鼠。
    E 用注射器抽取腹腔液(剪開(kāi)腹腔,把內(nèi)臟推向一側(cè),用吸管或不裝針頭的注射器吸取腹腔液),滴片,然后蓋上蓋片。
    F 鏡下觀察。

    (二)觀察蟾蜍白細(xì)胞的吞噬活動(dòng)

    A 用注射器吸取蟾蜍生理鹽水稀釋墨汁 0.5~1 ml,注射入蟾蜍尾桿骨兩側(cè)的背淋巴囊內(nèi),將蟾蜍放在室溫環(huán)境中。
    B 約 2~3 h 后,用注射器抽取背淋巴囊內(nèi)的淋巴液,滴在載玻片上,加蓋玻片進(jìn)行觀察。

    注意事項(xiàng)

    1 頸椎脫位法處死小鼠:將小鼠放在實(shí)驗(yàn)臺(tái)上,右手抓住鼠尾向后拉,左手的拇指和食指向下按住頭部;此時(shí)雙手的拇指和食指在顱骨和脊椎間同時(shí)向外用力一扽,使顱腦與脊髓分離,從而造成脊髓與腦髓斷離,小鼠會(huì)立即死亡。參見(jiàn)圖 4-3。

    2 蟾蜍尾桿骨兩側(cè)的背淋巴囊。參見(jiàn)圖 4-4。




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