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    如何做好HE染色？

    發(fā)布時(shí)間： 2022-10-25　　點(diǎn)擊次數(shù)： 1562次
    HE染色是組織切片最為常用的染色法之一。其中，蘇木精染液為堿性，主要使細(xì)胞核內(nèi)的染色質(zhì)與胞質(zhì)內(nèi)的核酸表現(xiàn)為藍(lán)色；伊紅為酸性染料，主要使細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞外基質(zhì)中的成分呈現(xiàn)紅色。



    但如何保證自己每一次都能完成漂亮的染色呢？有道是老馬都可以失前蹄兒，為了讓大家對(duì)HE染色有著更清晰的認(rèn)識(shí)，小編搜集查詢了下面的內(nèi)容，希望能對(duì)大家的染色技巧有一定的提升。


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    顏色篇


    （1）染色結(jié)果紅藍(lán)失調(diào)
    偏藍(lán)，蘇木精染色過(guò)深或伊紅染色時(shí)間太短導(dǎo)致其分化過(guò)度；偏紅，細(xì)胞核未成功染色，蘇木精染色過(guò)淺或伊紅染色過(guò)深，脫蠟不透徹也是一個(gè)原因。

    （2）細(xì)胞核染色問(wèn)題
    細(xì)胞核顏色暗淡，可能原因是蘇木精染液染色時(shí)間過(guò)短或者蘇木精過(guò)度氧化失效。這種情況是可以重新染色的，只需要將組織切片放入0.01%氫氧化鈉溶液、0.5%氨水溶液、飽和的碳酸氫鈉溶液、乙醇溶液中，每個(gè)大概3-5min即可重新染色。
    細(xì)胞核顏色過(guò)深，拋開(kāi)切片本身厚度問(wèn)題則可能是蘇木精染色停留時(shí)間相對(duì)過(guò)長(zhǎng)造成的，如果是過(guò)厚則需要重新制片，不是可以重新染色。

    （3）染色不均勻
    切片過(guò)厚、厚薄不一、染色液過(guò)少都會(huì)導(dǎo)致染色效果不均勻的情況。此外，脫蠟前未烘烤或脫蠟不完整也會(huì)導(dǎo)致這種情況。

    （4）染色模糊
    切片組織固定不佳，如固定不及時(shí)或深部組織未處理；脫蠟不完整；切片包埋時(shí)溫度過(guò)高，切片后烤片溫度過(guò)高時(shí)間過(guò)久；乙醇可能也會(huì)導(dǎo)致染色模糊，乙醇可能導(dǎo)致組織發(fā)硬變脆造成染色模糊。水霧殘留在組織上也會(huì)導(dǎo)致這種情況。

    （5）出現(xiàn)白色或黑色斑點(diǎn)
    黑色斑點(diǎn)可能是由于脫水不完整造成的殘留；白色斑點(diǎn)可能是烤片時(shí)間過(guò)短溫度偏低蠟并未全融化導(dǎo)致的，也可能是切片在脫蠟溶劑中停留時(shí)間相對(duì)較短導(dǎo)致。

    （6）淡染甚至無(wú)法染色
    出現(xiàn)這種情況一般是固定時(shí)使用了酸性甲醛或在甲醛中浸泡過(guò)久導(dǎo)致的。已經(jīng)固定的切片則可嘗試再次固定；已經(jīng)制好的切片可以在染色前使用5%重鉻酸鉀溶液浸泡至少半小時(shí)后用水漂洗可改善染色效果。還可以將切片放入3%硫酸鐵銨溶液中，補(bǔ)充染色媒介改善染色效果。

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    技術(shù)篇


    （1）蘇木精
    商用染色液質(zhì)量良莠不齊，如果有條件可以自己配置。使用乙酸濃度5%-7.5%和鹽酸濃度為0.5%-1%的蘇木精溶液放置一周，即可全成熟，染色效果好，氧化膜和結(jié)晶都很少。

    （2）冰醋酸增強(qiáng)染色效果
    少量的冰醋酸（小于10%）加入到伊紅溶液中可以伊紅與胞漿蛋白質(zhì)結(jié)合增強(qiáng)染色效果；少量的冰醋酸（小于2%）可以蘇木精染色效能，方便控制染色時(shí)間。

    （3）切片脫落
    組織本身硬度較大或壞死的在染色時(shí)就易脫落；切片過(guò)厚或者切片破碎也是脫落的原因；染色過(guò)程漂洗粗暴；反藍(lán)液堿性過(guò)強(qiáng)，可以使用自來(lái)水（pH 7.5~7.8）效果可能更好；烤片時(shí)間和溫度過(guò)短過(guò)低，或過(guò)久過(guò)高，一般30 min即可。

    （4）醇性HE染液與水溶性染液
    兩種都是可以的。相對(duì)于醇性染色液體，水溶性染色比較自由，易操作，分辨度相對(duì)低一點(diǎn)。但是醇性染色液體揮發(fā)性較高，對(duì)染色技術(shù)要求較高，但是染色效果更好，分辨度更高。


     


    以上就是一些HE染色中可能出現(xiàn)的狀況或者需要大家提前注意的內(nèi)容了，分別整理為顏色篇和技術(shù)篇供大家參考，希望可以幫到大家。

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