現(xiàn)已被廣泛用于免疫學、細胞生物學、血液學、腫瘤學、微生物學等多個領域。典型的應用實例包括血液系統(tǒng)疾病的免疫分型，腫瘤學中細胞 DNA 的倍體和周期分析，細胞生物學研究中的細胞凋亡、增殖，細胞表面或胞內(nèi)的抗原檢測等。

其中，流式技術較為廣泛的應用是使用流式抗體進行細胞的分型鑒定，常見的免疫表型分析實驗包括單細胞懸液制備、細胞表面或胞內(nèi)抗體的染色、上機檢測等基本步驟。

直接法：熒光標記的抗體直接與細胞的抗原結(jié)合，一步孵育后即可以進行細胞的流式上機檢測。直接法因為其方便快捷，交叉反應和背景少，是目前主流的流式標記手段。

間接法：細胞先與一抗進行孵育，然后熒光二抗再結(jié)合到一抗上形成免疫檢測復合物，后續(xù)即可以進行上機。當商品化的直標抗體無法獲得時，間接法可以作為補充，但間接法在多色實驗中很難避免種屬間的交叉反應，選擇性會大大受到影響。

兩種流式細胞標記法原理見圖 1。

圖 1 流式抗體標記常見的兩種形式

（左圖為直接法，右圖為間接法）

除選擇上述兩種商品化標記抗體外，還可使用抗體標記試劑盒標記抗體，獲取實驗所需的熒光標記抗體，但該方法對技術要求高，標記效果往往受多種因素影響。常見的傳統(tǒng)流式細胞標記方法，見表 1。

表 1 常見的傳統(tǒng)流式細胞標記方法

隨著流式細胞儀、單克隆抗體和熒光探針的不斷發(fā)展，流式分析已經(jīng)從早期的單激光單色檢測，發(fā)展到可快速同時定量檢測一種細胞的多種特性，多色多參數(shù)多激光的檢測分析。

同時分析多個抗原或多種細胞特性的能力為越來越復雜的實驗打開了新的大門，但多色流式細胞分析需要平衡多個難題的解法，包括儀器配置、抗原表達和染料亮度，以及可用的抗體- 染料組合等，考慮的要素見圖 2。

圖 2 流式多色方案設計需要考慮的要素

流式的配色需要綜合考慮以下因素：

如果研究人員無法在一次實驗中妥善調(diào)和上述因素，就需要退而求其次，進行多次分析。而多次分析難免引入各不相同的實驗條件，由此造成的數(shù)據(jù)波動最終會導致數(shù)據(jù)結(jié)果不可靠。

ColorWheel^® 流式抗體和染料組合采用專為流式細胞術優(yōu)化的專（禾刂）技術，支持用戶分別選擇抗體和染料并根據(jù)自身需要任意組合，在保證實驗成功率的同時又可幫助簡化流式細胞分析流程，突破傳統(tǒng)流式分析方案的局限。

主要優(yōu)勢：

ColorWheel^® 技術基于專（禾刂）的寡核苷酸配對連接技術將抗體與染料偶聯(lián)起來（詳見圖 3），偶聯(lián)產(chǎn)物與熒光標記的直標抗體保持一致，可以直接用于流式的標記檢測。該技術的偶聯(lián)過程只需要簡單的 1:1 的混合，其偶聯(lián)過程比起傳統(tǒng)的抗體標記方法大大簡化。ColorWheel^® 流式抗體的選擇靈活性能讓使用者更加靈活的設計多色方案，擺脫由于抗體熒光組合缺失導致的配色困境（詳見表 2）。

圖 3  ColorWheel 流式抗體偶聯(lián)技術示意

表 2 Colorwheel^® 助力突破傳統(tǒng)多色流式分析的局限

應用舉例：

ColorWheel^® 不僅可以簡化流式細胞分析流程，突破傳統(tǒng)流式分析方案的局限，同時可以保證在多重指標的流式實驗中具有優(yōu)異的表現(xiàn)。

以下實驗檢測了免疫 T 細胞檢測常用的指標 CD3，CD4，CD44，CD45RA，該 4 重指標的實驗用來評估 CD4+ 輔助型T細胞的激活狀態(tài)。結(jié)果顯示，ColorWheel^® 流式抗體與傳統(tǒng)的流式抗體具有同樣優(yōu)異的表現(xiàn)（詳見圖 4）。

圖 4 ColorWheel 流式抗體與傳統(tǒng)流式抗體的檢測效果比較（左邊是 ColorWheel^® 結(jié)果，右邊是傳統(tǒng)數(shù)據(jù)）