-
實時熒光定量PCR的優(yōu)化(五)
發(fā)布時間: 2021-10-12 點擊次數(shù): 1110次想要提高探針的的效果,可以考慮在探針上采用LNA(鎖核酸)堿基或MGB(小溝結(jié)合劑)基團(tuán)。
這樣做的效果是:
1、增強(qiáng)探針與靶序列的雜交強(qiáng)度。增強(qiáng)結(jié)合的特異性后,背景噪聲降低,從而提高整個實驗的靈敏度。
2、一般為滿足設(shè)計要求,AT序列豐富的探針需要長達(dá)40個核苷酸。通過LNA堿基或MGB的取代,可以將長度減少至13~20個核苷酸,而不影響效果。
為什么這樣的方法可以提高探針的效果?
LNA堿基是一種核苷酸類似物,其化學(xué)結(jié)構(gòu)可以限制DNA構(gòu)象為理想的Waston-Crick雙螺旋結(jié)構(gòu)。每插入1個LNA堿基,可以使Tm值增加3~6°C。
MGB基團(tuán)是一個能結(jié)合到DNA小溝的三肽分子,能與互補(bǔ)的單鏈DNA高特異性、高強(qiáng)度地結(jié)合。
例如SNP基因分型實驗,要求所有引物、探針復(fù)性溫度一致的多重PCR實驗,就很適合使用這個方法。
產(chǎn)品中心
Products
-
血清系列
-
細(xì)胞轉(zhuǎn)染
-
支原體清除
-
細(xì)胞凍存
-
實驗耗材
-
分子試劑
-
細(xì)胞增殖與凋亡
-
Biozellen系列
-
培養(yǎng)基
-
ELISA試劑盒
-
TOYOBO(東洋紡)
-
ZYMO RESEARCH
-
Greiner(格瑞納)
-
IKA(艾卡)
-
化學(xué)發(fā)光底物(ECL)
-
PROSPEC系列
-
Epigentek系列
-
微生物檢測
-
細(xì)胞生物學(xué)
-
Corning康寧
-
解離試劑
-
細(xì)胞類-實驗耗材
-
原代細(xì)胞
-
植物檢測系列試劑盒
-
SERANA
-
細(xì)胞系
-
生化試劑盒
-
環(huán)境檢測系列試劑盒(AKEN)
-
類器官培養(yǎng)
-
緩沖器和解決方案
-
生物三凝膠基質(zhì)
-
細(xì)胞因子分子
-
生物樣本庫